Optimizan protocolo de PCR convencional para detectar viroides en paltos Hass

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Optimizan protocolo de PCR convencional para detectar viroides en paltos Hass

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Investigadores de la Universidad a Católica de Santa María lograron optimizar un protocolo de PCR convencional para detectar los viroides Avocado sunblotch viroid (ASBVd) y Potato spindle tuber viroid (PSTVd) de Persea americana Mill.

Los viroides son agentes infecciosos que, al igual que los virus, tienen un ciclo extracelular que se caracteriza por la inactividad metabólica y un ciclo intracelular en el que causan infección al huésped susceptible, pero que a diferencia de los virus, los viroides no poseen proteínas ni lípidos y están constituidos por una cadena cíclica corta de ARN, circular o con forma de varilla, (que no codifica proteínas)

El palto es una planta de interés alimenticio, cuyo problema a nivel del cultivo son las enfermedades que reducen tanto la calidad fitosanitaria y post-cosecha; de entre ellos tenemos a las producidas por los viroides, entre ellos se tiene al Avocado sunblotch viroid (ASBVd) y el Potato spindle tuber viroid (PSTVd) quienes disminuyen dramáticamente las propiedades organolépticas del fruto.

Durante el proceso de producción de dicho cultivo es necesario contar con plantones libres de patógenos lo que hace necesario su temprana detección. En la actualidad existen métodos de detección cuyo costo aproximado es de 24 USD a través del uso de la técnica de PCR tiempo real.

En la búsqueda de métodos de detección más baratos y confiables se llevó a cabo la estandarización de un protocolo de PCR convencional que permita disminuir el costo de detección de viroides en plantas madre de palto. Para ello se hizo uso de la técnica de Retrotranscriptasa reversa acoplada la reacción en cadena de la polimerasa (RT-PCR) tiempo final haciendo uso de los kit One-Step RT-PCR (Novagen) y Two-step (Promega), siendo el segundo el que ofreció el mejor resultado.

Finalmente, se logró amplificar las bandas que identifican a los viroides empleando la técnica de PCR tiempo final, reduciendo así el costo de detección a un aproximado de 12 USD por muestra.

El palto es una especie frutal de importancia económica, en especial la variedad Hass que tiene una gran demanda mundial por su alto contenido de aceites, carbohidratos, proteínas y vitaminas, así como por la preferencia de sus consumidores, esto ha conllevado a un progresivo incremento de la producción y exportación del mismo en el Perú llevándolo a ser el 8vo país productor a nivel mundial. Dicha demanda generó un incremento de las condiciones competitivas de calidad e inocuidad exigidas generando nuevas normativas de calidad para esta clase de producto como las GLOBALGAP

De entre las enfermedades que afectan a dicho cultivar las provocadas por los viroides Avocado sunblotch viroid (ASBVd) y el Potato spindle tuber viroid (PSTVd) se ha visto que producen un decaimiento en las propiedades organolépticas del fruto, reduciendo y deteriorando su valor comercial, ambos han sido detectados en el Perú por el Instituto Nacional de Investigación Agraria (INIA) y el Centro Internacional de la Papa (CIP) (Barrera & Rojas, 2007; Flores, Daròs, & Hernández, 2000; Querci, Owens, Vargas, & Salazar, 1995).

Dentro de las mejores medidas usadas para el control de enfermedades causadas por viroides están: la prevención de introducción de material infectado (tanto en campos de cultivo así como en invernaderos), el manejo de estrictos procedimientos de higiene y el monitoreo de la aparición de síntomas.

La técnica de Real-time PCR ha sido desarrollada para generar aún mayor sensibilidad y especificidad en sus resultados, sin embargo, requiere equipamiento y reactivos especiales que lo hacen costoso, por lo cual, se busca generar técnicas más baratas y aplicables a escala. La técnica de reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa (RT-PCR) convencional es una buena alternativa por su menor costo que solo requiere un RNA total de buena calidad, cDNA y primers específicos.

La investigación busca optimizar la técnica de PCR convencional para detectar los viroides ASBVd y PSTVd presentes en Persea americana Mill var Hass infectadas y obtener así un método más económico.

 

CORRESPONDENCIA

Dra. María Valderrama-Valencia

marov52@yahoo.com

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